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      ELISA試劑盒使用及開發(fā)過程中常見問題及對(duì)策

       更新時(shí)間:2013-12-17    點(diǎn)擊量:3944

       

      現(xiàn)象

      可能原因

      解決方法

      板條不顯色或者無相應(yīng)數(shù)值

      試劑使用順序混亂,或操作步驟出錯(cuò)

      嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)說明重復(fù)實(shí)驗(yàn)

      使用了不同批次的試劑

      確保試劑來自同一試劑盒

      板條受潮嚴(yán)重

      板條要封好,干燥劑失效要及時(shí)更換

      OD

      試劑過期,或者不同的批次混用

      查證過期試劑和批次

      洗液配制錯(cuò)誤、洗滌浸泡時(shí)間過長(zhǎng)

      按照說明書要求洗滌,并正確配制洗液

      孵育時(shí)間過短

      按照說明書要求,嚴(yán)格計(jì)算好時(shí)間

      試劑污染

      確保吸取不同液體更換新的槍頭和盛放器皿

      試劑溫度過低

      根據(jù)試劑體積大小回溫時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng),確保試劑*回溫

      使用錯(cuò)誤波長(zhǎng)讀數(shù),或者酶

      標(biāo)儀失靈

      確保450 nm波長(zhǎng)讀數(shù),檢查酶標(biāo)儀是否故障

      試劑盒處于的條件

      使用完畢的部分請(qǐng)立即放回冰箱,勿置于過熱環(huán)境時(shí)間太長(zhǎng)

      過高的

      背景值或吸光度(OD值)

      使用了質(zhì)量差的水配制試劑

      使用雙蒸水或去離子水配制試劑

      洗滌不當(dāng)或者洗板機(jī)洗板效果不好

      增加1-2次洗滌,每孔至少加入250μL洗液

      酶標(biāo)儀失靈,如OD值讀數(shù)很高而顏色很淺

      使用校正微孔板檢查酶標(biāo)儀,檢查光源

      實(shí)驗(yàn)室溫度過高,反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)

      測(cè)定操作溫度是否合適,時(shí)間是否計(jì)算正確

      試劑混淆,被污染或者配制不當(dāng)

      確保使用正確的試劑,準(zhǔn)確配制,避免污染

      板內(nèi)

      差異性

      加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品等的時(shí)間不一致

      使用多道槍加樣,同種試劑加樣途中不能中斷

      多道槍使用不當(dāng)

      校準(zhǔn)多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

      洗滌系統(tǒng)出現(xiàn)故障

      檢查洗滌系統(tǒng),保持良好運(yùn)行

      板與板之間孵育時(shí)間相差太大

      獨(dú)立計(jì)時(shí),確保一致的孵育時(shí)間

      板與板之間不一致的洗滌過程

      確保相同的洗滌次數(shù),保證洗滌系統(tǒng)正常運(yùn)作

      使用移液槍不當(dāng)

      檢查移液槍,確保吸取相同液量

      試劑和樣品處于不同溫度

      確保盒內(nèi)試劑和樣品液等充分回溫,如果試劑體積較大則需要回溫較長(zhǎng)時(shí)間。不能用溫水浴回溫樣品

      不同批次的試劑混用,或試劑盒過期

      試劑不要混用,通常0標(biāo)準(zhǔn)品的OD值小于0.5顯示試劑質(zhì)量下降

      一個(gè)或

      多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)點(diǎn)超出曲線范圍

      標(biāo)準(zhǔn)品添加順序混亂,或者放置于錯(cuò)誤位置

      按照說明要求重復(fù)實(shí)驗(yàn),保證標(biāo)準(zhǔn)品添加正確

      標(biāo)準(zhǔn)品被污染或與其他標(biāo)準(zhǔn)品混淆

      改用新的標(biāo)準(zhǔn)品,按照由低濃度到高濃度的順序添加標(biāo)準(zhǔn)品

      洗滌不一致或者洗滌系統(tǒng)失靈

      遵循一如既往的洗滌方式,檢查洗滌系統(tǒng)

      加入標(biāo)準(zhǔn)品和試劑的時(shí)間不一致

      由低到高濃度依次添加標(biāo)準(zhǔn)品,使用多道槍移液

      多道槍使用不當(dāng)

      校準(zhǔn)多道槍,檢查吸嘴是否套緊,確保吸液量一致

       

       

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