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玉米赤霉烯酮免疫親和柱的制備方法有哪些?
更新時間:2024-06-16 點擊量:
169
玉米赤霉烯酮免疫親和柱
是一種實驗室分離、純化、檢測玉米赤霉烯酮的常用工具。赤霉烯酮是一種由真菌產生的毒素,它的存在可能導致玉米等農作物的大量死亡,而且容易引起人畜的食物中毒,因此需要對其進行檢測。
玉米赤霉烯酮免疫親和柱
的制備方法主要包括以下幾個步驟:
1、選擇抗體:首先需要選擇一種對玉米赤霉烯酮具有高親和力和特異性的抗體。這種抗體可以通過篩選雜交瘤細胞庫或者通過基因工程手段獲得。
2、抗體固定化:將選定的抗體通過化學鍵合或者物理吸附的方式固定在載體上。常用的載體有瓊脂糖、硅膠、聚苯乙烯等。固定化的方法包括共價鍵合、離子鍵合、疏水作用、金屬螯合等。其中,共價鍵合法是常用的方法,如使用溴化氰活化的瓊脂糖凝膠作為載體,將抗體通過其氨基與載體上的活性基團發(fā)生反應,實現(xiàn)抗體的固定化。
3、裝柱:將固定化抗體的載體填充到柱子中,形成一個免疫親和柱。柱子的大小和形狀可以根據實際需求進行調整。裝柱時要保證載體在柱內的分布均勻,避免出現(xiàn)空洞或者堆積現(xiàn)象。
4、封閉非特異性結合位點:為了減少非特異性吸附,需要在柱子中加入一定濃度的封閉劑,如牛血清白蛋白、明膠等。封閉劑可以與載體上的非特異性結合位點結合,從而降低背景噪音。
5、樣品處理:將含有玉米赤霉烯酮的樣品經過適當?shù)那疤幚恚珉x心、過濾、稀釋等,使其適應要求。然后將處理后的樣品加入到
玉米赤霉烯酮免疫親和柱
中,使玉米赤霉烯酮與固定化的抗體發(fā)生特異性結合。
8、免疫親和柱的再生:為了延長其使用壽命,需要進行再生處理。通常采用高濃度的鹽溶液或者酸堿溶液對柱子進行清洗,去除殘留的雜質和抗體。再生后的可以重復使用多次。
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