抗體純化試劑盒說明書

（單次純化100mg-500mg抗體） 

一、 原理

蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。

二、適用范圍

動物血清、腹水的濃縮、提純。

三、抗體純化特點

粗純純度＞90%；

精細(xì)純度＞98%

四、試劑盒組成（可單次純化100mg）

五、純化步驟

（一）粗純

①取待純化抗體6ml，加入6ml磷酸鹽緩沖液進行稀釋,再加入12ml粗純純化液，搖勻1分鐘；

②立即8000prm/min離心5min，棄去上清，得到沉淀物；

③加入復(fù)溶液，復(fù)溶。
（二）精細(xì)純化

①親和柱用去離子水洗去20%乙醇，再用結(jié)合液清洗2遍；

②用結(jié)合液稀釋抗體濃度為1mg/ml，上樣，控制流速為20秒/滴；

③抗體流完后加入原抗體等體積結(jié)合液沖洗柱內(nèi)抗體；

④結(jié)合液流完后加入洗脫液，洗脫目的蛋白，取1.5ml離心管收集洗脫液得到抗體溶液；

⑤目的蛋白測蛋白濃度；

⑥用20%乙醇保存柱子，于4℃冰箱中保存，可反復(fù)使用10次以上。

七、 注意事項

①操作置于室溫進行，所用溶液用前先回溫，上樣前均需要用0.2微米濾膜過濾。

②避免樣品反復(fù)凍融和劇烈攪動，以防蛋白質(zhì)的變性。

④精純抗體上樣前需要用0.2微米濾膜過濾。

⑤蛋白濃度不要高于1mg/ml。

⑥親和柱在使用過程中，要求液體不能流干，基質(zhì)中不得有氣泡存在。

⑦上樣前，樣品需離心或用濾膜過濾，以防堵塞柱子。

⑧樣品過渡裂解會引起蛋白變性，降低結(jié)合載量，采用溫和的裂解方法，增加結(jié)合載量。需要控制上樣和洗脫時流速讓其有足夠的吸附和分離時間，以便達(dá)到最大的結(jié)合載量。

⑨蛋白的性質(zhì)、pH、溫度等也會影響蛋白的結(jié)合載量。

八、貯藏條件及保存期

    貯藏條件：-4℃

保 質(zhì) 期： 12個月