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      細胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

      簡要描述:細胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

      試劑盒應用
      本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內完成細胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶K、無需低溫離心。該配方中含有RNA保護劑,能夠抑制RNA降解、保護RNA完整,從而提高RNA產量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構建等。
      本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領域。

      • 產品型號:
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-04-27
      • 訪  問  量:709
      詳情介紹

      細胞和組織RNA核酸免提取試劑盒

       

      試劑盒應用

      本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內完成細胞和組織樣本的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶K、無需低溫離心。該配方中含有RNA保護劑,能夠抑制RNA降解、保護RNA完整,從而提高RNA產量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCRNorthern Blot、分子克隆、文庫構建等。

      本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領域。

       

      試劑盒組成

      組分

      Col-R010150T

      編號

      裂解液C

      35 mL

      Col-R0101A

      洗滌液CW1

      25 mL

      Col-R0101B

      洗滌液CW2

      12 mL

      Col-R0101C

      洗脫液C

      5 mL


      RNA吸附柱

      50

      Col-R0101E

      備注:第一次使用前,在洗滌液CW2中加入48mL無水乙醇,并標記"和時間,避免重復加入。

       

      保存條件

      室溫保存一年。

       

      自備材料

      水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mLRNase離心管、DNase I2U/μL,或貨號QR0102

       

      使用方法

      1. 樣本處理

      1.1 從動物組織中提取RNA

      1.1.1 20-100mg樣本放入液氮中充分研磨,加入700μL裂解液C顛倒混勻。

      或者20-100mg樣本加入700μL裂解液C,加入1顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨1-2分鐘。

      備注:不同樣本中RNA含量差異很大,過多使用樣本容易導致堵塞,最終導致RNA提取量下降。

      1.1.2 55℃孵育1分鐘。

      1.1.3 12,000rpm離心1分鐘,取500μL上清。

      1.1.4 加入250μL無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

       

      1.2 從懸浮細胞中提取RNA

      1.2.1 細胞1,000rpm離心5分鐘,收集細胞沉淀。

      1.2.2 細胞數量<5×106時,加入500μL裂解液C。細胞數量為5×106~1×107時,加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

      1.2.3 12,000rpm離心1分鐘。

      1.2.4 細胞數量<5×106時,450μL上清。細胞數量為5×106~1×107時,650μL上清。

      1.2.5 加入0.5倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

       

      1.3 從貼壁細胞中提取RNA

      1.3.1 yimei消化細胞后1,000rpm離心5分鐘,收集細胞沉淀。

      1.3.2 細胞數量<5×106時,加入500μL裂解液C。細胞數量為5×106~1×107時,加入700μL裂解液C。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

      1.3.3 12,000rpm離心1分鐘。

      1.2.4 細胞數量<5×106時,450μL上清。細胞數量為5×106~1×107時,650μL上清。

      1.2.5 加入0.5倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

       

      2. RNA純化

      2.1全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中廢液。

      2.2 RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW1,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

      2.3 RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CW2,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

      2.4 重復步驟2.3一次。

      2.5 12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中廢液。

      2.6 RNA吸附柱放入新1.5mLRNase離心管中,加入30-50μL洗脫液C,室溫放置1分鐘。

      2.7 12,000rpm離心2分鐘,得到RNA溶液,-80℃保存。

       

      注意事項

      1. 務必在超凈臺中進行操作,常換手套,防止RNA降解。

      2. 盡可能使用新鮮樣本進行RNA提取。

      3. 使用無DNaseRNase的吸頭和離心管,防止RNA降解,常更換吸頭,防止交叉污染。

      4. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液C置于65℃水浴后再使用。

      5. 根據后續(xù)試驗需求,請使用DNase I(貨號QR0102)進行基因組清除。

       

      常見問題解析

      問題

      可能原因

      推薦解決方案

      RNA吸附柱

      堵塞

      (1)上樣量太高

      (2)加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物

      (1)減少上樣量。

      (2)增加離心時間。

      (3)切勿吸取到可見固體成分。

      (4)再次離心。

      RNA得率低

      (1)未離心下來

      (2)樣本量太大,裂解不充分

      (1)減少樣本量。

      (2)重復洗脫步驟一次。

      RNA降解

      (1)樣本不新鮮

      (2)RNA酶污染

      (1)使用新鮮樣本。

      (2)使用保存在樣品保存液中樣本。

      (3)樣本保存在-80℃甚至液氮中,盡可能現取現用。

      (4)常更換手套。

      (5)常更換吸頭和離心管。

      (6)使用無DNaseRNase的吸頭和離心管。

       


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