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      小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書

      簡要描述:小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書樣本前處理:
      取適量病料心、肝、腸等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照1:3體積稀釋成均勻乳劑,經(jīng)10 000rpm離心3 min。

      • 產(chǎn)品型號:
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時間:2022-04-07
      • 訪  問  量:1059
      詳情介紹

      小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書

      【用途】 用于小鵝瘟病毒核酸的檢測。

      試劑

      編號

      20T

      50T

      保存

      裂解液

      4mL

      10mL

      室溫

      A

      無水乙醇

      4mL

      10mL

      室溫

      去蛋白漂洗液

      12mL

      28mL

      室溫

      洗滌液

      32mL

      77mL

      室溫

      洗脫液

      2mL

      5mL

      室溫

      蛋白酶K

      0.2mL

      0.5mL

      -20

      B

      PCR反應(yīng)液

      200μL

      500μL

      -20

      引物

      40μL

      100μL

      -20

      陽性對照

      30μL

      30μL

      -20

      陰性對照

      300μL

      300μL

      -20

      DL2000 DNA Marker

      20μL

      50μL

      -20

      小鵝瘟病毒PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】

      1.樣本前處理及核酸提取  

      樣本前處理

      取適量病料心、肝、腸等組織,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照13體積稀釋成均勻乳劑,經(jīng)10 000rpm離心3 min。

      核酸提?。?/span>

      (1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8)混勻5~10秒。

      (2)56℃溫浴10分鐘。

      (3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分振蕩混勻510秒。

      (4)將步驟3中混勻的液體轉(zhuǎn)移至一只套有收集管的純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,棄去套管內(nèi)液體。

      (5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內(nèi)液體。

      (6)將700μL洗滌液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內(nèi)液體。

      (7)可選:重復(fù)步驟(6)。

      (8)再將純化柱放回接液管上,13 000rpm離心1分鐘。

      (9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

      (10)向離心柱內(nèi)加50μL洗脫液,室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘,棄純化柱,離心管內(nèi)液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用,請保存于-20℃。

      2. PCR加樣體系(總體系20 μL將下列試劑加入PCR反應(yīng)管中。

      PCR反應(yīng)液

      引物

      10μL

      2.0μL

      模   板

      8μL

      (注:陰、陽性對照設(shè)立,由試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品直接替換“模板"即可。)

      3. 反應(yīng)程序

                 94預(yù)變性

       5min

                 94變性

       30s

                 51退火

       30s   34個循環(huán)

                 72延伸

       30s  

                 72延伸             6min

                 4

      5min

      4.

      配制1%瓊脂糖凝膠,取PCR產(chǎn)物5uL,加樣于凝膠孔中,同時在相鄰孔加3μl DL2000 DNA Marker,在120v-130v 電壓下,1×TAE液中電泳15-20min,在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

      【結(jié)果判定】

         372b左右位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶,核酸檢測為陽性(如圖)。

         372b左右位置未出現(xiàn)擴(kuò)增帶,核酸檢測為陰性                        

                               


      1.B使用之前請*溶解并離心數(shù)秒后使用,蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。

      2 反復(fù)凍融試劑將降低檢測靈敏度,盡量減少反復(fù)凍融。

      3 為避免樣本間的交叉污染,模板最后加,加模板時先加陰性對照,再加檢測樣品,最后加陽性對照,有條件的實驗室加模板的移液器應(yīng)與加其它組份的移液器分開。

      4 上機(jī)前注意檢查確保反應(yīng)混合液內(nèi)無氣泡,且反應(yīng)管蓋緊。

      【生產(chǎn)企業(yè)】  

      企業(yè)名稱:山東綠都生物科技有限公司

      生產(chǎn)地址:山東省濱州市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)黃河二路169號綠都生物工程高科技園

      【有效期】本制品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝內(nèi)側(cè)。

      僅供獸醫(yī)診斷使用


      長期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

      長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)


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