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      山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書

      簡要描述:山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書樣本前處理:
      取適量皮膚丘疹、肺部病變組織、淋巴結,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照1:3體積稀釋成均勻乳劑,經10 000rpm離心3 min。

      • 產品型號:
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2022-04-07
      • 訪  問  量:1056
      詳情介紹

      山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書

      【用途】 用于山羊痘病毒核酸的檢測。

      試劑

      編號

      20T

      50T

      保存

      裂解液

      4mL

      10mL

      室溫

      A

      無水乙醇

      4mL

      10mL

      室溫

      去蛋白漂洗液

      12mL

      28mL

      室溫

      洗滌液

      32mL

      77mL

      室溫

      洗脫液

      2mL

      5mL

      室溫

      蛋白酶K

      0.2mL

      0.5mL

      -20

      B

      PCR反應液

      200μL

      500μL

      -20

      引物和探針

      40μL

      100μL

      -20

      陽性對照

      30μL

      30μL

      -20

      滅菌水

      300μL

      300μL

      -20

      山羊痘病毒實時熒光PCR檢測試劑盒說明書操作步驟】

      1.樣本前處理及核酸提取  

      樣本前處理

      取適量皮膚丘疹、肺部病變組織、淋巴結,于滅菌研缽充分研磨,用PBS按照13體積稀釋成均勻乳劑,10 000rpm離心3 min。

      核酸提?。?/span>

      (1)取200μL上述樣本離心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,劇烈振蕩。(蛋白酶K開蓋使用后建議存于2-8)混勻5~10秒。

      (2)56℃溫浴10分鐘。

      (3)在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分振蕩混勻510秒。

      (4)將步驟3中混勻的液體轉移至一只套有收集管的純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,棄去套管內液體。

      (5)將500μL去蛋白漂洗液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

      (6)將700μL洗滌液加入純化柱上,10 000rpm離心1分鐘,并棄去套管內液體。

      (7)可選:重復步驟(6)。

      (8)再將純化柱放回接液管上,13 000rpm離心1分鐘。

      (9)將純化柱移到一只干凈的1.5mL離心管中。

      (10)向離心柱內加50μL洗脫液,室溫靜置1分鐘后12 000rpm離心1分鐘,棄純化柱,離心管內液體中含有基因組DNA。提純的基因組DNA如果不立即使用,請保存于-20℃。

      2. 熒光PCR加樣體系(總體系20 μL將下列試劑加入PCR反應管中。

      PCR反應液

      引物和探針

      10μL

      2μL

      模   板

      滅菌水

      2μL

      6μL

      (注:陰、陽性對照設立,由試劑盒提供的陽性對照、滅菌水直接替換“模板"即可。)

      3. 反應程序

      在熒光PCR儀上進行以下反應:95 ℃ 180s,循環(huán)95 ℃ 5 s55 10 s,72 20 s,共45, 每次循環(huán)的第步(72 20 s)收集熒光信號(報告基團HEX",淬滅基團BHQ1")。

      【結果判定】

      1 閾值設定

      檢測結束后,根據(jù)收集的熒光曲線和 Ct值直接讀取檢測結果,Ct值為每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環(huán)數(shù)。閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的最高點為準。

      2 質控標準

      (1) 陰性對照:無Ct值無擴增曲線。

      (2) 陽性對照:Ct值≤30.0,并出現(xiàn)典型的擴增曲線。若陰、陽性對照組結果不成立,則視為無效檢驗。

      3 結果描述及判定

      陰性  被檢樣品無Ct值且無明顯擴增曲線,判為山羊痘病毒核酸陰性;

      陽性  檢測樣品Ct值≤42.0且出現(xiàn)典型的擴增曲線時,判為山羊痘病毒核酸陽性;

      可疑  對于Ct值>42.0的樣品且出現(xiàn)典型的擴增曲線或者Ct值≤42.0但無典型的擴增曲線時,應重檢,重檢Ct值≤42.0且出現(xiàn)典型的擴增曲線時判為陽性,其他情況均判為陰性。

      【注意事項】

      1.B使用之前請*溶解并離心數(shù)秒后使用,蛋白酶K開蓋使用后建議保存于2-8℃。

      2 反復凍融試劑將降低檢測靈敏度,盡量減少反復凍融。

      3 為避免樣本間的交叉污染,模板最后加,加模板時先加陰性對照,再加檢測樣品,最后加陽性對照,有條件的實驗室加模板的移液器應與加其它組份的移液器分開。

      4 上機前注意檢查確保反應混合液內無氣泡,且反應管蓋緊,以免熒光物質泄漏區(qū)污染儀器。

      【生產企業(yè)】  

      企業(yè)名稱:山東綠都生物科技有限公司

      生產地址:山東省濱州市經濟開發(fā)區(qū)黃河二路169號綠都生物工程高科技園      

      【有效期】本制品有效期為1年,生產日期見包裝內側。

      僅供獸醫(yī)診斷使用

      長期提供原核、真核蛋白表達構建服務

      長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務


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