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      牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

      簡要描述:牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒1、洗滌液配制
      將濃縮洗滌液(20&#215;)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1&#215;),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1&#215;)作為洗板用。

      • 產(chǎn)品型號:
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時間:2022-04-07
      • 訪  問  量:1425
      詳情介紹

      牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒          

      使用說明書

      【產(chǎn)品名稱】

      通用名稱:口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒

      英文名稱:Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting FMDV Type O Antibodies

      【規(guī)格】96T×2

      牛羊口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒用途】

      檢測牛、羊等血清中的口蹄疫O型抗體,適用于動物疫苗免疫抗體監(jiān)測。

      【儲藏與有效期】28保存,有效期12個月。

      【主要組份】

      序號

      組份名稱

      數(shù)量

      1

      FMDV-O抗原包被板

      96T×2

      2

      HRP-OFMD單抗

      12mL×1

      3

      樣品稀釋液

      20mL×1

      4

      FMDV-O陰性對照

      1.0mL×1

      5

      FMDV-O陽性對照

      1.0mL×1

      6

      單組份TMB

      12mL×1

      7

      終止液

      12mL×1

      8

      濃縮洗滌液(20×)

      50mL×1

      9

      說明書

      1

      【試驗(yàn)操作】

      1、洗滌液配制

      將濃縮洗滌液(20×)用蒸餾水或去離子水稀釋成洗滌液(1×),即1份濃縮洗滌液加入19份蒸餾水,配制的洗滌液(1×)作為洗板用。

      2、定性檢測方案(單孔定性,每板檢測92份血清樣本)

      【操作步驟】

      2.1加樣:設(shè)陰性對照血清(A1B1)和陽性血清(C1D1)2孔,直接加入50ul/孔對照血清;其它為被檢樣品孔,預(yù)先在相應(yīng)孔內(nèi)加入45ul的稀釋液,接著加入5ul/孔待檢血清;最后,在所有孔內(nèi)均加入50ulHRP-OFMD單抗,被檢血清即為120稀釋。振蕩,混勻,37℃溫育30分鐘。

      2.2TMB底物:用洗滌液洗板3遍,最后一次拍干,加入TMB底物,50ul/孔,37℃溫育15分鐘。

      2.3反應(yīng)終止: 加入終止液,50ul/孔,終止反應(yīng)。

      2.4讀值:酶標(biāo)儀450nm波長讀數(shù)。

      【計算方法】

      2.5阻斷率計算

      陰性對照平均值=(OD-A1+OD-B1/2;

      陽性對照平均值=(OD+C1+OD+D1/2;

      樣品阻斷 PI=[(陰性對照平均值-樣品OD值)/陰性對照平均值]×100%

      根據(jù)以上公式計算被檢樣品和陽性對照樣品的阻斷率。

        2.6試驗(yàn)成立

         兩孔陰性對照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5;兩孔陽性對照至少一孔的阻斷率大于60%。

      【結(jié)果判定】

      被檢樣品PI≥50%判為口蹄疫病毒O型抗體陽性;PI<50%判為口蹄疫病毒O型抗體陰性。

      3、檢測方案(每板檢測1020份血清樣本)

      在使用前,所有的試劑盒組份應(yīng)恢復(fù)到室溫。試劑應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或振蕩混勻。每個樣品使用一個單獨(dú)的吸頭。

      3.1樣品稀釋: 取出FMDO抗原包被板,根據(jù)不同的需要,選擇圖1或圖2中的一種布局進(jìn)行操作。圖1為可檢測10份樣品布局圖;圖2為可檢測20份樣品布局圖。每次試驗(yàn),每板均需設(shè)置陰陽性血清對照及4孔不加血清單抗對照。

      以圖1為例操作,A1A10每孔各75µL稀釋液,其它所有孔內(nèi)各加入50µL的稀釋液。A1A10每孔各加25µL待檢樣品A1150µL的陽性對照,A1250µL的陰性對照,用排槍吹打混勻(每孔吹打35次),待檢樣品A1A10分別50µL/的量從AH連續(xù)2倍稀釋;陽性對照A1150µL/的量從AH連續(xù)2倍稀釋;陰性對照A1250µL/的量從AB連續(xù)2倍稀釋。待檢樣品在第110列從1:4稀釋至1:512;陽性對照,從1:2稀釋至1:256,由于試劑盒提供的陽性對照已1:4稀釋,則變?yōu)閺?/span>1:8稀釋至1:1024;陰性對照,從1:2稀釋至1:4。

      3.2 加入HRPOFMD單抗:樣品稀釋好后,在所有孔內(nèi)加入50ulHRPOFMD單抗,反應(yīng)體系即為100µL/。加樣完畢后,所有稀釋度翻倍,待檢樣品從1:81:1024,陽性對照從1:161:2048,陰性對照從1:41:8,貼封板膜,振蕩混勻。將加好樣的ELISA反應(yīng)板置于37溫育30分鐘。

      3.3洗板:230μL±20μL)洗滌液(1×)洗滌板孔,共洗滌3次。每次洗滌后應(yīng)棄去孔內(nèi)的液體。在最后一次洗滌液棄去后,將孔中殘留的洗滌液拍干。50μL/孔加入TMB底物,37避光溫育1015min。

      3.4讀值: 每孔再加50μL終止液終止反應(yīng),立即在450nm波長下讀取OD值。

      1  96孔板檢測10份樣品布局圖


      1

      2

      3

      4

      5

      6

      7

      8

      9

      10

      11

      12

      A

      S1 1:8

      S2

      S3

      S4

      S5

      S6

      S7

      S8

      S9

      S10

      1:16

      1:4

      B

      1:16










      1:32

      1:8

      C

      1:32










      1:64

      空白

      D

      1:64










      1:128

      空白

      E

      1:128










      1:256

      不加血清單抗

      對照

      F

      1:256










      1:512

      G

      1:512










      1:1024

      H

      1:1024










      1:2048

      2  96孔板檢測20份樣品布局圖


      1

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      3

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      A

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      B

      1:32










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      C

      1:64










      1:64

      空白

      D

      1:128










      1:128

      空白

      E

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      S18

      S19

      S20

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      不加血清單抗

      對照

      F

      1:32










      1:512

      G

      1:64










      1:1024

      H

      1:128










      1:2048

      【結(jié)果分析】

      3.5試驗(yàn)成立判斷

      不加血清單抗對照OD值應(yīng)在2.0±1.5范圍內(nèi);

      陽性對照抗體效價不低于1:1024±1滴度;

      陰性對照抗體效價應(yīng)<1:8。

      3.6結(jié)果判定

      不加血清單抗對照4孔,棄去最高和OD值,計算剩余2孔的平均OD值,再除以2,即得50%對照值,該值即為臨界值,表示阻斷50%反應(yīng)的對照OD值。待檢樣品OD臨界值,判為陰性孔;待檢樣品OD臨界值,判為陽性孔。每份待檢樣品系列梯度稀釋中,陽性孔的最高稀釋倍數(shù)即為該待檢樣品的抗體效價。若臨界值處于兩個稀釋孔OD值之間,抗體效價取相鄰陽性孔和陰性孔稀釋倍數(shù)的反對數(shù)中間值。如臨界值處于1:64(反對數(shù)值為1.8)與1:128(反對數(shù)值為2.1)之間,則判定該份待檢樣品的抗體效價為1:90(反對數(shù)值為1.95)。

      抗體效價64,為疫苗免疫合格。

      抗體效價計算對照表(反對數(shù)值)

      抗體效價

      Log10(效價)

      對照計算

      抗體效價

      Log10(效價)

      對照計算

      抗體效價

      Log10(效價)

      對照計算

      1:4

      0.6

      1:32

      1.5

      1:256

      2.4

      1:6

      0.75

      1:45

      1.65

      1:360

      2.55

      1:8

      0.9

      1:64

      1.8

      1:512

      2.7

      1:11

      1.05

      1:90

      1.95

      1:720

      2.85

      1:16

      1.2

      1:128

      2.1

      1:1024

      3

      1:22

      1.35

      1:180

      2.25

      1:1440

      3.15

      4、注意事項(xiàng)

      4.1 為使您的實(shí)驗(yàn)獲得正確結(jié)果,請您在實(shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本說明書。

      4.2 所有試劑使用前恢復(fù)至室溫(1826),以免溫度過低影響抗原抗體反應(yīng)。

      4.3實(shí)驗(yàn)前應(yīng)用溫度計檢查溫箱溫度,溫度過高或過低影響OD值高低。

      4.4 包被板反應(yīng)時嚴(yán)禁堆疊放置,應(yīng)該平鋪且板間有空隙,不要離溫箱壁太近。

      4.5實(shí)驗(yàn)所用移液器及設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)。

      4.6采集的樣品要新鮮,并且最好不要溶血。血清標(biāo)本在28放置不要超過2天,室溫不超過8小時,如需長時間放置應(yīng)儲存于-20。

      僅供獸醫(yī)診斷使用    

      長期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

      長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)


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