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      雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒

      簡要描述:雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒取疑似病料(氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織),用PBS研磨成1:3懸液,在-20℃凍融1次,經(jīng)12000 r/min離心3 min,上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

      • 產(chǎn)品型號:
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時(shí)間:2022-04-07
      • 訪  問  量:1020
      詳情介紹

      雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書

      【用途】用于雞傳染性支氣管炎病毒核酸的檢測。

      【規(guī)格】50T/

      【試劑】

      編號

      數(shù)量(50T

      保存

      SR-I

      10mL

      室溫

      A

      SR-II

      25mL

      室溫

      SR-

      36mL

      室溫

      SR-

      18mL

      室溫

      TU-1

      3.75mL

      室溫

      TU-2

      2.5mL

      室溫

      RT-PCR反應(yīng)液

      500uL

      -20

      B

      酶混合液

      50uL

      -20

      引物混合液

      100uL

      -20

      陽性對照

      30uL

      -20

      陰性對照

      100uL

      -20

      ddH2O

      1mL

      -20

      6xDNA Loading buffer

      100uL

      -20

      Marker DL2000

      50uL

      -20

      【操作步驟】

      1.雞傳染性支氣管炎病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒核酸提取  

      (1) 取疑似病料(氣管及分泌物、腎臟、肺臟等病毒靶組織),用PBS研磨成13懸液,在-20℃凍融1次,經(jīng)12000 r/min離心3 min,上清液-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/span>

      2200uL上清液,移入1.5mL滅菌EP管中,加入200uLSR-I漩渦振蕩混合均勻,靜置5min。

      3)加75uL TU-1,漩渦振蕩混合均勻,12000r/min離心5 min。

      4)將上清轉(zhuǎn)移到新的2 ml離心管(試劑盒內(nèi)提供)中,加入300 uL SR-,上下倒置6-8次,混合均勻。

      5)將步驟4中的混合液移入制備管中(試劑盒內(nèi)提供),并將制備管置于同一2 ml離心管,8000 r/min離心1min。

      6)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加500 uL SR-II,室溫靜置1min,12000 r/min離心1 min。

      7)棄濾液,將制備管置回到2 ml離心管中,加700 uL SR-12000 r/min離心1 min。

      8)將制備管置回到2 ml離心管中,12000 r/min離心2min。

      9) 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中(試劑盒內(nèi)提供),在制備管膜中央加40 uL TU-2, 室溫靜置1 min。12000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板,即用或-20凍存?zhèn)溆谩?/span>

      2.One-Step RT- PCR加樣體系(20uL體系)

      RT-PCR反應(yīng)液

      10uL

      引物混合液

      2uL

      酶混合液

      0.8uL

      ddH2O

      模板

      5.2uL

      2uL

      3.反應(yīng)程序

      1

      50

      45min


      2

      3

      94預(yù)變性

      94變性

      5min

      45 s


      4

      52退火

      45 s

      34個(gè)循環(huán)3~5步)

      5

      72延伸

      45 s


      6

      72延伸

      6min


      7

      4終止

      5min


      4.電泳

      配制1.0%瓊脂糖凝膠,取PCR產(chǎn)物5uL,混合1uL6xDNA Loading buffer,加樣于凝膠孔中,同時(shí)在相鄰孔加5uL DL2000 DNA Marker,在120-150v 電壓下,1×TAE液中電泳15-20min,在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

      【結(jié)果判定】

      在約490bp左右位置出現(xiàn)擴(kuò)增帶,表明雞傳染性支氣管炎病毒核酸檢測陽性;

      若在490bp處沒有條帶出現(xiàn)則樣品判為陰性。

      1.標(biāo)準(zhǔn)陽性片段M.DL2000 Marker

      【注意事項(xiàng)】

      1. 陽性對照極易污染試驗(yàn)環(huán)境,如果做陽性對照,吸取陽性對照槍頭妥善處理

      2. -20℃保存的試劑在使用前應(yīng)*融化,振蕩混勻后 8000rpm 離心 15 使液體全部沉于管底,置冰盒中取用。嚴(yán)禁使用超過有效期限的試劑;嚴(yán)禁混用不同試劑盒組分。

      3. PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按功能分為配液區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、電泳區(qū)。物流方向依次為配液區(qū) →樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→電泳區(qū)。所有接觸病料的物品、器具,尤其是陽性對照及PCR 產(chǎn)物和使用后的電泳緩沖液均應(yīng)合理處置,以免污染實(shí)驗(yàn)室。

      4. 嚴(yán)格按照國標(biāo)和說明書要求操作。吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體上層吸取,移液精確;吸取不同液體時(shí)必須更換移液器滴頭,防止試劑組分污染以及樣品污染。

      5.試劑盒組分在生產(chǎn)分裝時(shí)考慮到液體的損耗,實(shí)際裝量略多于標(biāo)注裝量,因此嚴(yán)禁直接在 原包裝中配制反應(yīng)體系,以免造成反應(yīng)體系各組分比例不準(zhǔn)確。

      【保存期】本制品有效期為1年。

      僅供獸醫(yī)診斷使用


      長期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

      長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)


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