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      細(xì)胞RNA核酸免提取試劑盒

      簡要描述:細(xì)胞RNA核酸免提取試劑盒

      試劑盒應(yīng)用
      本試劑盒采用專用裂解液CP在10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶K、無需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑,能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整,從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。
      本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

      • 產(chǎn)品型號(hào):
      • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
      • 更新時(shí)間:2023-04-27
      • 訪  問  量:696
      詳情介紹

      細(xì)胞RNA核酸免提取試劑盒

       

      試劑盒應(yīng)用

      本試劑盒采用專用裂解液CP10分鐘內(nèi)完成細(xì)胞的裂解、提取和純化。無需使用蛋白酶K、無需低溫離心。該配方中含有RNA保護(hù)劑,能夠抑制RNA降解、保護(hù)RNA完整,從而提高RNA產(chǎn)量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCRNorthern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。

      本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

       

      試劑盒組成

      組分

      Col-R010250T

      編號(hào)

      裂解液CP

      35 mL

      Col-R0102A

      洗滌液CPW

      12 mL

      Col-R0102B

      洗脫液C

      5 mL


      RNA吸附柱

      50

      Col-R0102D

      備注:第一次使用前,在洗滌液CPW中加入48mL無水乙醇,并標(biāo)記"和時(shí)間,避免重復(fù)加入。

       

      保存條件

      室溫保存一年

       

      自備材料

      水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、1.5mLRNase離心管、DNase I2U/μL,或貨號(hào)QR0102

       

      使用方法

      1. 樣本準(zhǔn)備

      1.1 懸浮細(xì)胞1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

      或貼壁細(xì)胞用yimei消化細(xì)胞后1,000rpm離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

      1.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),加入500μL裂解液CP。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),加入700μL裂解液CP。輕輕吹打混勻。55℃孵育1分鐘。

      1.3 12,000rpm離心1分鐘。

      1.4 細(xì)胞數(shù)量<5×106個(gè)時(shí),450μL上清。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107個(gè)時(shí),650μL上清。

      1.5 加入0.5倍體積無水乙醇,充分混勻。按照步驟2.1-2.7操作。

       

      2. RNA純化

      2.1全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中廢液。

      2.2RNA吸附柱中加入500μL洗滌液CPW,12,000rpm離心30秒,倒掉收集管中廢液。

      2.3 重復(fù)步驟2.2一次。

      2.5 12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中廢液。

      2.6 RNA吸附柱放入新1.5mLRNase離心管中,加入30-50μL洗脫液C,室溫放置1分鐘。

      2.7 12,000rpm離心2分鐘,得到RNA溶液,-80℃保存。

       

      注意事項(xiàng)

      1. 務(wù)必在超凈臺(tái)中進(jìn)行操作,常換手套,防止RNA降解。

      2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取。

      3. 使用無DNaseRNase的吸頭和離心管,防止RNA降解,常更換吸頭,防止交叉污染。

      4. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液CP置于65℃水浴后再使用。

      5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求,請(qǐng)使用DNase I(貨號(hào)QR0102)進(jìn)行基因組清除。

       

      常見問題解析

      問題

      可能原因

      推薦解決方案

      RNA吸附柱

      堵塞

      (1)上樣量太高

      (2)加入RNA吸附柱的液體中有固體成分或沉淀物

      (1)減少上樣量。

      (2)增加離心時(shí)間。

      (3)切勿吸取到可見固體成分。

      (4)再次離心。

      RNA得率低

      (1)未離心下來

      (2)樣本量太大,裂解不充分

      (1)減少樣本量。

      (2)重復(fù)洗脫步驟一次。

      RNA降解

      (1)樣本不新鮮

      (2)RNA酶污染

      (1)使用新鮮樣本。

      (2)使用保存在樣品保存液中樣本。

      (3)樣本保存在-80℃甚至液氮中,盡可能現(xiàn)取現(xiàn)用。

      (4)常更換手套。

      (5)常更換吸頭和離心管。

      (6)使用無DNaseRNase的吸頭和離心管。

       


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